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5064-8267 ZORBAX 300SB-C18，3.5µm, 0.3 x 150 mm

應(yīng)用一種新的毛細(xì)管 HPLC-ICP-MS 接口進(jìn)
行富硒酵母中含硒蛋白的鑒定
飲食是人體硒 (Se) 的主要來(lái)源， 該必需元素的攝入主要取決于食品中的硒含量
和所消耗的食物量。 由于許多國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品中硒的含量很低， 所以硒缺乏成為了一
個(gè)值得注意的問(wèn)題。 人們已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多提高人體硒攝入的食品添加策略； 富硒
酵母就是人和動(dòng)物添加劑最常用的硒來(lái)源之一。
評(píng)估硒是否充分不僅需要了解硒總含量， 而且還要了解各種形態(tài)硒的含量。 但
到目前為止， 大部分研究都僅限于針對(duì)占總硒 12-20% 左右的水溶性酵母成分。
酵母的不溶性硒組分很多尚未被發(fā)現(xiàn)， 表征這類(lèi)主要組分的工作非常少， 其中
Chassaigne 和 Chéry [1] 曾研究過(guò)酵母蛋白的硒特異性激光消融 (LA-) ICP-MS指紋譜， Tastet 等人 [2] 曾用實(shí)驗(yàn)室自制的 nanoHPLCICP-MS 接口對(duì)富硒多肽進(jìn)行了硒選擇性檢測(cè)。 在常規(guī)方法
中， 通過(guò)測(cè)定總硒代蛋氨酸含量（ 含硒蛋白含量） 來(lái)評(píng)估
富硒酵母的質(zhì)量。
本研究提出了一個(gè) ICP-MS 輔助的蛋白質(zhì)組學(xué)方法， 用于
鑒定富硒酵母中的含硒蛋白。 采用雙向凝膠電泳分離不溶
性含硒蛋白。 使用 LA-ICP-MS 找出分離后的含硒蛋白斑
點(diǎn)， 經(jīng)切割后， 用胰蛋白酶消化； 所得多肽通過(guò)毛細(xì)管
HPLC-ICP-MS 進(jìn)行分析， 然后用電噴霧離子化 (ESI-) MS/MS
進(jìn)行表征， 鑒定出富硒酵母中主要的含硒蛋白——甘油
醛-3-磷酸酯脫氫酶-3。 由于胰蛋白酶裂解產(chǎn)物量非常少，
所以需要使用毛細(xì)管色譜

5064-8267安捷倫ZORBAX 300SB-C18色譜柱

文建立了有效的 ICP-MS 輔助蛋白質(zhì)組學(xué)方法， 用于鑒
定市售富硒酵母樣品不溶性硒組分中的含硒蛋白。 采用雙
向凝膠電泳分離含硒蛋白， 并用胰蛋白酶進(jìn)行裂解。 采用
LA-ICP-MS、 毛細(xì)管 HPLC-ICP-MS 和 ESI MS/MS 組合
方法對(duì)裂解產(chǎn)物進(jìn)行鑒定、 分析和表征。 由于胰酶裂解產(chǎn)
物量非常少， 所以需要使用毛細(xì)管色譜。 采用本方法鑒定
出了甘油醛-3-磷酸酯脫氫酶-3， 這是富硒酵母中的主要含
硒蛋白。 證明由于蛋白鏈中的硫-硒取代途徑而引入硒， 存
在于蛋氨酸 (M) 和半胱氨酸 (C) 殘基中， 后者在酵母樣品
中首次發(fā)現(xiàn)